Aká je úloha sondy v teste Animal Medical PCR v reálnom čase?

Ahoj! Ako dodávateľTest PCR na zvieratách, Z prvej ruky som videl kľúčovú úlohu, ktorú zohrávajú sondy pri testoch PCR na zvieratách v reálnom čase. V tomto blogovom príspevku rozoberiem, čo sú sondy, ako fungujú a prečo sú také dôležité vo svete starostlivosti o zvieratá.

Čo sú sondy v real-time PCR?

Začnime od základov. V real-time PCR je sonda krátka, jednovláknová molekula DNA alebo RNA, ktorá je navrhnutá tak, aby sa naviazala na špecifickú cieľovú sekvenciu v rámci DNA alebo RNA patogénu alebo genetického materiálu, ktorý sa pokúšate detekovať. Tieto sondy sú označené fluorescenčným reportérovým farbivom na jednom konci a zhášacou molekulou na druhom konci.

Keď je sonda neporušená, molekula zoslabovača bráni fluorescenčnému farbivu vyžarovať svetlo. Ale keď enzým DNA polymeráza počas procesu PCR rozbije sondu, keď replikuje cieľovú DNA, fluorescenčné farbivo sa uvoľní z vplyvu zhášača. To má za následok zvýšenie fluorescencie, ktoré môže byť detekované prístrojom PCR.

Ako fungujú sondy pri testoch PCR na zvieratách v reálnom čase?

V testoch PCR na zvieratách v reálnom čase sa sondy používajú na detekciu špecifických patogénov, ako sú vírusy, baktérie alebo parazity, vo vzorkách zvierat. Proces zvyčajne začína odberom vzorky zo zvieraťa, ako je krv, sliny alebo tkanivo. Vzorka sa potom spracuje na extrakciu DNA alebo RNA.

Po extrakcii genetického materiálu sa zmieša s primérmi, sondami a inými činidlami v reakčnej skúmavke PCR. Priméry sú krátke sekvencie DNA, ktoré sa viažu na cieľovú DNA na oboch stranách oblasti, ktorú chcete amplifikovať. PCR stroj potom prechádza sériou teplotných cyklov na amplifikáciu cieľovej DNA.

Keď sa cieľová DNA amplifikuje, sondy sa viažu na svoje komplementárne sekvencie v rámci amplifikovanej DNA. Keď DNA polymeráza rozbije sondy, fluorescenčný signál sa zvýši. Zariadenie PCR meria toto zvýšenie fluorescencie v reálnom čase, čo nám umožňuje monitorovať proces amplifikácie, ako sa deje.

Prečo sú sondy dôležité pri testoch PCR na zvieratách v reálnom čase?

Špecifickosť

Jednou z najväčších výhod použitia sond v real-time PCR testoch je ich vysoká špecifickosť. Sondy sú navrhnuté tak, aby sa viazali na veľmi špecifické cieľové sekvencie, čo znamená, že dokážu presne detegovať prítomnosť konkrétneho patogénu alebo genetického markera. Toto je obzvlášť dôležité v starostlivosti o zvieratá, kde je pre účinnú liečbu rozhodujúca presná diagnóza.

Napríklad, ak má veterinár podozrenie, že pes má určitú vírusovú infekciu, test PCR v reálnom čase so špecifickou sondou môže potvrdiť prítomnosť vírusu s vysokou mierou presnosti. To umožňuje veterinárovi predpísať vhodnú liečbu a vyhnúť sa zbytočným liekom.

Citlivosť

Sondy tiež robia testy PCR v reálnom čase vysoko citlivé. Dokážu odhaliť veľmi nízke hladiny cieľovej DNA alebo RNA vo vzorke, čo je dôležité pre včasnú detekciu chorôb. V mnohých prípadoch môže včasná detekcia viesť k lepším výsledkom liečby a vyššej šanci na uzdravenie zvieraťa.

Napríklad v prípade nákazlivej choroby môže včasná detekcia pomôcť zabrániť šíreniu patogénu na iné zvieratá. Použitím testu PCR v reálnom čase s citlivou sondou môžu veterinári identifikovať infikované zvieratá skôr, ako začnú prejavovať symptómy, a prijať vhodné opatrenia na potlačenie prepuknutia choroby.

Kvantifikácia

Ďalšou dôležitou vlastnosťou testov PCR v reálnom čase so sondami je schopnosť kvantifikovať množstvo cieľovej DNA alebo RNA vo vzorke. Toto je známe ako kvantitatívna PCR (qPCR). Meraním fluorescenčného signálu v rôznych časových bodoch počas procesu PCR môžeme určiť počiatočné množstvo cieľovej DNA alebo RNA vo vzorke.

Táto kvantifikácia je užitočná v mnohých aplikáciách, ako je monitorovanie progresie ochorenia, hodnotenie účinnosti liečby alebo štúdium prevalencie patogénu v populácii. Napríklad vo výskumnej štúdii konkrétneho vírusu v skupine zvierat možno qPCR použiť na meranie vírusovej záťaže u každého zvieraťa v priebehu času.

Aplikácie sond v testoch PCR na zvieratách v reálnom čase

Diagnóza ochorenia

Ako už bolo spomenuté, sondy sa široko používajú v testoch PCR v reálnom čase na diagnostiku chorôb u zvierat. Môžu detekovať rôzne patogény vrátane vírusov (ako je psí parvovírus, vírus mačacej leukémie), baktérie (ako je Salmonella, E. coli) a parazity (ako je Toxoplasma gondii).

Presná a včasná diagnóza je nevyhnutná na poskytnutie vhodnej liečby chorým zvieratám. Použitím testov PCR v reálnom čase so špecifickými sondami môžu veterinári rýchlo identifikovať príčinu ochorenia a začať so správnym liečebným plánom.

Dohľad nad chorobami

Sondy sú tiež cenné v programoch sledovania chorôb. Cieľom týchto programov je monitorovať prevalenciu a šírenie chorôb v populáciách zvierat. Pravidelným testovaním vzoriek z rôznych zvierat a lokalít dokážeme odhaliť vznikajúce choroby, sledovať šírenie existujúcich chorôb a zaviesť vhodné kontrolné opatrenia.

Napríklad na farme hospodárskych zvierat možno použiť testy PCR v reálnom čase so sondami na monitorovanie prítomnosti bežných patogénov u zvierat. Ak sa zistí nový patogén, farma môže podniknúť kroky na zabránenie jeho šírenia, ako je izolácia infikovaných zvierat, zlepšenie opatrení biologickej bezpečnosti alebo očkovanie zostávajúcich zvierat.

Výskum

V oblasti výskumu na zvieratách sa sondy v testoch PCR v reálnom čase používajú na štúdium rôznych aspektov genetiky a chorôb zvierat. Môžu byť použité na identifikáciu genetických mutácií, štúdium vzorcov génovej expresie alebo skúmanie interakcie medzi patogénmi a ich hostiteľmi.

Napríklad výskumníci môžu použiť testy PCR v reálnom čase so sondami na štúdium toho, ako konkrétny vírus ovplyvňuje génovú expresiu imunitného systému zvieraťa. Tieto informácie môžu pomôcť pri vývoji nových vakcín alebo liečebných stratégií.

Naša úloha ako dodávateľa testov PCR na zvieratách

Ako dodávateľTest PCR na zvieratách, chápeme dôležitosť vysoko kvalitných sond v testoch PCR v reálnom čase. Ponúkame širokú škálu sond, ktoré sú špeciálne navrhnuté pre medicínske aplikácie zvierat.

Naše sondy sú starostlivo navrhnuté a vyrobené tak, aby zabezpečili vysokú špecifickosť, citlivosť a spoľahlivosť. Používame najnovšie technológie a opatrenia na kontrolu kvality, aby sme zabezpečili, že naše sondy budú fungovať konzistentne v testoch PCR v reálnom čase.

Okrem sond poskytujeme aj ďalšie reagencie a súpravy preLaboratórne testovanie na zvieratách. Naše produkty používajú veterinári, výskumné inštitúcie a laboratóriá pre zdravie zvierat po celom svete.

Kontaktujte nás a dohodnite si obstaranie a vyjednávanie

Ak máte záujem o kúpu našich produktov na analýzu PCR na zvieratách vrátane sond, alebo ak máte akékoľvek otázky týkajúce sa našich produktov alebo služieb, neváhajte nás kontaktovať. Vždy vám radi pomôžeme a tešíme sa na spoluprácu s vami pri zlepšovaní zdravia zvierat pomocou presných a spoľahlivých diagnostických nástrojov.

Referencie

• Bustin, SA, Beneš, V., Garson, JA, Hellemans, J., Huggett, J., Kubista, M., ... & Wittwer, CT (2009). Smernice MIQE: minimálne informácie pre publikovanie kvantitatívnych experimentov PCR v reálnom čase. Clinical Chemistry, 55(4), 611-622.
• Mackay, IM, Arden, KE a Nitsche, A. (2002). PCR v reálnom čase vo virológii. Nucleic Acids Research, 30(6), 1292-1305.
• Nolan, T., Hands, RE a Bustin, SA (2006). Kvantifikácia mRNA pomocou RT-PCR v reálnom čase. Nature Protocols, 1(3), 1559-1582.